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          胰蛋白酶的作用有哪些
        1. 發布日期:2022-06-06      瀏覽次數:40
          • 胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種,EC 3.4.4.4,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性最強的蛋白酶,在決定蛋白質的氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。

            胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時,胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ,如: D-Hanks 液。終止消化時,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
            1. 稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。攪拌混勻,置于 4℃ 內過夜。
            2. 用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌。
            3. 分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用可。

            胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTA Solution)含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA(0.53mM),溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經過濾除菌,可以直接用于培養細胞和組織的消化。本產品具有方便快速、穩定安全、細胞狀態好等特點。

            產品說明:

            在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(如細胞外基質)水解,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。


            使用方法:

            1. 貼壁細胞的消化:

            a) 吸去培養液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

            b) 加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。

            c) 顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。

            d) 如果發現消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

            e) 如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。

            2. 組織的消化:

            不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。


            注意事項:

            1.由于組織或細胞性質不同,實驗人員應依據具體情況,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;

            2.本產品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染;

            3.不宜4℃長期保存,切忌反復凍融,小量使用時建議分裝凍存;

            4.  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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