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          Trizol提取RNA的詳細步驟
        1. 發布日期:2022-06-01      瀏覽次數:62
          • 1、在提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5-10╳106個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞。

            2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘;在EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘。

            3、取上層水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘。

            4、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,棄上清;讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。

            Ps:在收集到生物材料之后,最好馬上進行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。

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